【答案】:用于篩選具有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HPRT)和胸苷激酶(TK)活性缺陷細(xì)胞的培養(yǎng)基,內(nèi)含次黃嘌呤(hypoxanthine)、氨基喋呤(aminopterin)和胸腺嘧啶核苷(thymidine)三種,簡(jiǎn)稱HAT。常用這種選擇培養(yǎng)基來(lái)篩選雜交瘤細(xì)胞。能分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞是由瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞(脾細(xì)胞)融合而成的。通常只有一部分瘤細(xì)胞融合成為雜交瘤細(xì)胞。因此必須設(shè)法把雜交瘤細(xì)胞從未融合的細(xì)胞中篩選出來(lái)。目前通用的辦法是利用次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺陷型(HGPRT)和胸腺核苷激酶缺陷型(TK)瘤細(xì)胞株,這兩種缺陷型細(xì)胞在HAT選擇培養(yǎng)基中不能存活,而被淘汰。選擇培養(yǎng)基對(duì)淋巴細(xì)胞無(wú)效,但淋巴細(xì)胞在培養(yǎng)條件下不能長(zhǎng)期存活,因而也被自然淘汰。瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞融合成的雜交瘤細(xì)胞,由于繼承了脾細(xì)胞合成HGPRT酶和TK酶的能力,可在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)存活。
全稱不同、用途不同等區(qū)別。
1、全稱不同:HAT培養(yǎng)基的全稱為Hypoxanthine-Aminopterin-Thymidine培養(yǎng)基,是一種選擇性培養(yǎng)基;而HT培養(yǎng)基的全稱為High-Temperature培養(yǎng)基,是一種高溫培養(yǎng)基。
2、用途不同:HAT培養(yǎng)基主要用于細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn),可以選擇性地殺死未融合的細(xì)胞,使融合細(xì)胞能夠生長(zhǎng);而HT培養(yǎng)基主要用于調(diào)整菌株的生長(zhǎng)溫度,可以促進(jìn)某些菌株的生長(zhǎng)和繁殖。
HAT選擇培養(yǎng)基的作用是篩選出含有次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤核苷磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)或胸腺嘧啶核苷激酶(TK)的細(xì)胞。
HAT選擇性培養(yǎng)基是根據(jù)次黃嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途徑設(shè)計(jì)的。缺失這兩種酶的細(xì)胞,在HAT培養(yǎng)基中,應(yīng)該不能生存,只有發(fā)生融合或者其他情況下,才能是細(xì)胞重新獲得用旁路途徑進(jìn)行DNA合成能力。
擴(kuò)展材料:
HAT選擇法即胸苷激酶基因選擇法,胸苷激酶(Thymidine Kinase,簡(jiǎn)稱TK)能催化胸苷(T)轉(zhuǎn)變成dTMP,進(jìn)而生成dTTP。
TK選擇系統(tǒng)將含有tk+基因的表達(dá)載體導(dǎo)入tk-宿主細(xì)胞,再用含有次黃嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸苷(T)的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,其中A為葉酸類似物,可阻斷dATP,dGTP的合成,及dUMP到dTTP的轉(zhuǎn)化,但H可合成IMP,再由IMP合成dATP和dGTP,含有載體的tk+細(xì)胞能利用T合成dTTP,故可合成DNA使細(xì)胞存活,不含載體的tk-細(xì)胞不能利用T合成dTTP,無(wú)法合成DNA使細(xì)胞死亡。
該系統(tǒng)中的tk+基因能報(bào)告載體的導(dǎo)入,稱報(bào)告基因,培養(yǎng)基中含有H,A和T,故將這種選擇方法稱做HAT選擇法。
參考來(lái)源:百度百科-HAT培養(yǎng)液、百度百科-hat培養(yǎng)基、百度百科-HAT選擇法
由于氨基蝶呤可阻礙起始合成途徑,所以培養(yǎng)基中含有它時(shí),細(xì)胞便只有中間合成途徑,所以必須供給核苷酸。至于缺失中間合成途徑的細(xì)胞,可失去增殖能力臻于死亡。根據(jù)這一點(diǎn),不僅把混存于細(xì)胞群中的正常細(xì)胞,通過(guò)試管內(nèi)培養(yǎng)進(jìn)行選擇,例如嘌呤的中間合成途徑缺失株和嘧啶的中間合成途徑缺失株,由于可以互補(bǔ),所以兩者的雜種細(xì)胞,即使在氨基蝶呤的存在條件下也可以增殖。在這種情況下,利用HAT培養(yǎng)基可對(duì)雜種細(xì)胞進(jìn)行選擇。次黃嘌呤和胸腺嘧啶脫氧核苷可作為中間合成途徑的原料而進(jìn)行添加。